Direct, simple derivatization of disulfide bonds in proteins with organic mercury in alkaline medium without any chemical pre-reducing agents.

Campanella, B ; Onor, M ; et al.

In: Analytica chimica acta, Jg. 843 (2014-09-16), S. 1-6

academicJournal

In this work we have studied the derivatization of protein disulfide bonds with p-Hydroxymercurybenzoate (pHMB) in strong alkaline medium without any preliminary reduction. The reaction has been followed by the determination of the protein-pHMB complex using size exclusion chromatography coupled to a microwave/UV mercury oxidation system for the on-line oxidation of free and protein-complexed pHMB and atomic fluorescence spectrometry (SEC-CVG-AFS) detection. The reaction has been optimized by an experimental design using lysozyme as a model protein and applied to several thiolic proteins. The proposed method reports, for the first time, that it is possible to label 75-100% cysteines of proteins and, thus, to determine thiolic proteins without the need of any reducing step to obtain reduced SH groups before mercury labelling. We obtained a detection limit of 100 nmol L(-1) based on a signal-to-noise ratio of 3 for unbound and complexed pHMB, corresponding to a detection limit of proteins ranged between 3 and 360 nmol L(-1), depending on the number of cysteines in the protein sequence.

Titel:	Direct, simple derivatization of disulfide bonds in proteins with organic mercury in alkaline medium without any chemical pre-reducing agents.
Autor/in / Beteiligte Person:	Campanella, B ; Onor, M ; Ferrari, C ; D'Ulivo, A ; Bramanti, E
Zeitschrift:	Analytica chimica acta, Jg. 843 (2014-09-16), S. 1-6
Veröffentlichung:	Amsterdam : Elsevier ; <i>Original Publication</i>: Amsterdam., 2014
Medientyp:	academicJournal
ISSN:	1873-4324 (electronic)
DOI:	10.1016/j.aca.2014.07.003
Schlagwort:	Chromatography, Liquid methods Chromatography, Gel methods Disulfides analysis Hydroxymercuribenzoates chemistry Muramidase analysis Reducing Agents
Sonstiges:	Nachgewiesen in: MEDLINE Sprachen: English Publication Type: Journal Article Language: English [Anal Chim Acta] 2014 Sep 16; Vol. 843, pp. 1-6. <i>Date of Electronic Publication: </i>2014 Jul 09. MeSH Terms: Reducing Agents* ; Chromatography, Gel / methods ; Disulfides / analysis ; Hydroxymercuribenzoates / chemistry ; Muramidase / analysis ; Chromatography, Liquid / methods Contributed Indexing: Keywords: Alkaline medium; Atomic fluorescence spectrometry; Disulfide bond derivatization; Proteins; p-Hydroxymercuribenzoic acid Substance Nomenclature: 0 (Disulfides) ; 0 (Hydroxymercuribenzoates) ; 0 (Reducing Agents) ; 138-85-2 (4-hydroxymercuribenzoate) ; EC 3.2.1.17 (Muramidase) Entry Date(s): Date Created: 20140825 Date Completed: 20150615 Latest Revision: 20140825 Update Code: 20231215

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