�������������������� ���������������� ������������������������������ CXC ���������������������� ���� ���������������� ���� ���� ���������� Hsp70-����������������
Aristotle University of Thessaloniki, 2013
Online
unknown
Zugriff:
���� ���������������������� ���������� ������������ �������������������������� ������������������ ���� ������������ ������������������ �������� ���������������� ���������������������� ������ �������������������������� ������ ���������������� ���� ������������������������ ��/������ ���������������������� ��������������������. �������� ������ ���������������� �������������� ������������������������ ������ ������������������������ ������������������ �������� ���������� ������������������ �������������� �� ���������������������������� ���������������������������� ���������������� ������������������������������ ����������������������. �������� �������������� ������������ ������������ ���� ���������� ���� ���������������������� ������������ ������������������ ������ ���� �������������������� ������ ���������������� �������� �������������������������� ���������������������� ������ ������������������������ ������ CXC ����������������������, ������ CXCL12�� (�� Stromal cell-derived factor-1��/SDF-1��) ������ ������ CXCL10 (�� Interferon-�� inducible protein-10/IP-10). ���������������� ������������������������������ ���������������������� ������ ���������������� Escherichia coli �������������� ������ �������������������� ������������������ ������������ �������� �������� ������ �������������������� ������������������. ������������������ ������������������������ ���������������������� ���������������������������� ������������ ���������������������� �������� ���������������������� ���������������������� �������������������������� ������������ ������������ ������ ������������������ ��������. ����������������, �������������� ������ SDF-1�� ������ IP-10 ���� ���������� ���������������� ���� ������ DnaK, ������ Hsp70 ���������������� ������������ ������ ������������������ E. coli, �������������� �������� ���������������� �������������� ������������������ ���������������� DnaK-SDF1�� ������ DnaK-IP10 ���� ������������������ ���������������������������� ������ ���������������������� �������������������������� ������������. �� ���������������������� ������ ���������������� �������������������������� ������ �� ���������������������� ���������� ������ DnaK ������ ���������������������� ������ ������������������ ���������������������� ���������������������������� ������ ������ ���� �������������������� ������ ������ �������������� ������ ���������������������� ���� ���������������� ���� ���� GST, ������ �������� �������������� ����������������, ���� ���������������� ���� ���������������������� ��������. ����������������, ���� ������������������ ������������������ GST-SDF1�� ������ GST-IP10 �������������������������� ������������ ������������������������ ������ �������������������� ������������������. ����������������, ���������� ������ �������� �� DnaK �������� �������������������� ������ ��������������-������������ �������� ������ ����������������������, ������ ������������ ���� ������������������ ������ �������� �������������������� ��������, ���������� ���� �������������� SDF1��-DnaK ������ IP10-DnaK ������������������������ ������ �������������� ��������������������������. ������������ ������������������ �������������������� �������������������� ���� ������������������������ ������������������������ MCF7 ���������������� �������������� ������ ���� ���������������������������� �������������� ������ ���������������� ���������������������� �������� �������������������� ������������.
Chemokines are signaling molecules that regulate cell migration and are considered as molecules of major biological importance both in physiological and pathological conditions. Given their significance, recombinant chemokines have become valuable research/diagnostic and therapeutic tools. The aim of the present thesis was to develop a bacterial expression system that permits the expression of large amounts of properly folded chemokines in bacteria. Overproduction of two recombinant CXC chemokines, CXCL12�� (or Stromal cell-derived factor-1��/SDF-1��) and CXCL10 (or Interferon-�� inducible protein-10/IP-10), in E. coli, leads to their aggregation and deposition in inclusion bodies, as covalently linked protein multimers. This multimerization is attributable to the formation of aberrant intermolecular disulfide bonds, instead of the proper intramolecular ones. Production of SDF-1�� and IP-10 as fusions with DnaK, the Hsp70 family member in E. coli, resulted in high levels of soluble DnaK-chemokine expression and negligible formation of intermolecular disulfide bonds. These effects do not stem from the presence of a highly soluble, bulky protein fusion partner of the chemokine, since they are not reproduced when the chemokine are expressed as fusions with another protein like GST. On the contrary, both GST-SDF1�� and GST-IP10 accumulated within inclusion bodies. The order of the protein partners within the fusion protein does not appear to affect protein folding and solubility, since both SDF1��-DnaK and IP10-DnaK fusion proteins partitioned almost exclusively in the soluble fraction. Furthermore, performance of wound healing assays in MCF7 cells using the above recombinant fusion proteins, indicated that all fusions were biologically active.
Titel: |
�������������������� ���������������� ������������������������������ CXC ���������������������� ���� ���������������� ���� ���� ���������� Hsp70-����������������
|
---|---|
Link: | |
Veröffentlichung: | Aristotle University of Thessaloniki, 2013 |
Medientyp: | unknown |
DOI: | 10.26262/heal.auth.ir.131832 |
Schlagwort: |
|
Sonstiges: |
|