Repair of Rhodopsin mRNA by Spliceosome-Mediated RNA Trans -Splicing: A New Approach for Autosomal Dominant Retinitis Pigmentosa
In: Molecular Therapy Molecular Therapy, 2015, 23 (5), pp.918-930. ⟨10.1038/mt.2015.11⟩ Molecular Therapy, Cell Press, 2015, 23 (5), pp.918-930. ⟨10.1038/mt.2015.11⟩; (2015-05-01)
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The promising clinical results obtained for ocular gene therapy in recent years have paved the way for gene supplementation to treat recessively inherited forms of retinal degeneration. The situation is more complex for dominant mutations, as the toxic mutant gene product must be removed. We used spliceosome-mediated RNA trans-splicing as a strategy for repairing the transcript of the rhodopsin gene, the gene most frequently mutated in autosomal dominant retinitis pigmentosa. We tested 17 different molecules targeting the pre-mRNA intron 1, by transient transfection of HEK-293T cells, with subsequent trans-splicing quantification at the transcript level. We found that the targeting of some parts of the intron promoted trans-splicing more efficiently than the targeting of other areas, and that trans-splicing rate could be increased by modifying the replacement sequence. We then developed cell lines stably expressing the rhodopsin gene, for the assessment of phenotypic criteria relevant to the pathogenesis of retinitis pigmentosa. Using this model, we showed that trans-splicing restored the correct localization of the protein to the plasma membrane. Finally, we tested our best candidate by AAV gene transfer in a mouse model of retinitis pigmentosa that expresses a mutant allele of the human rhodopsin gene, and demonstrated the feasibility of trans-splicing in vivo. This work paves the way for trans-splicing gene therapy to treat retinitis pigmentosa due to rhodopsin gene mutation and, more generally, for the treatment of genetic diseases with dominant transmission.
Titel: |
Repair of Rhodopsin mRNA by Spliceosome-Mediated RNA Trans -Splicing: A New Approach for Autosomal Dominant Retinitis Pigmentosa
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Autor/in / Beteiligte Person: | Bemelmans, Alexis-Pierre ; García, Luis F. ; Lorain, Stéphanie ; Desrosiers, Melissa ; Joséphine, Charlène ; Peccate, Cécile ; Berger, Adeline ; Sahel, José-Alain ; Voit, Thomas ; Institut de la Vision ; Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM)-Sorbonne Université (SU)-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) ; Institut de Myologie ; Université Pierre et Marie Curie - Paris 6 (UPMC)-Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Assistance publique - Hôpitaux de Paris (AP-HP) (AP-HP)-Association française contre les myopathies (AFM-Téléthon)-Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM)-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) ; Laboratoire des Maladies Neurodégénératives - UMR 9199 (LMN) ; Service MIRCEN (MIRCEN) ; Université Paris-Saclay-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)-Institut de Biologie François JACOB (JACOB) ; Direction de Recherche Fondamentale (CEA) (DRF (CEA)) ; Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Direction de Recherche Fondamentale (CEA) (DRF (CEA)) ; Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Université Paris-Saclay-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)-Institut de Biologie François JACOB (JACOB) ; Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) ; Centre de recherche en myologie ; Université Pierre et Marie Curie - Paris 6 (UPMC)-Association française contre les myopathies (AFM-Téléthon)-Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM)-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) ; Généthon ; Université Pierre et Marie Curie - Paris 6 (UPMC)-Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM)-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) ; Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS)-Sorbonne Université (SU)-Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale (INSERM) ; Institut de Biologie François JACOB (JACOB) ; Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Université Paris-Saclay-Institut de Biologie François JACOB (JACOB) ; Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Commissariat à l'énergie atomique et aux énergies alternatives (CEA)-Université Paris-Saclay-Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) |
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Quelle: | Molecular Therapy Molecular Therapy, 2015, 23 (5), pp.918-930. ⟨10.1038/mt.2015.11⟩ Molecular Therapy, Cell Press, 2015, 23 (5), pp.918-930. ⟨10.1038/mt.2015.11⟩; (2015-05-01) |
Veröffentlichung: | HAL CCSD, 2015 |
Medientyp: | unknown |
ISSN: | 1525-0016 (print) ; 1525-0024 (print) |
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