Optimisation of high-throughput analysis of mouse immunoglobulin G N-glycosylation

N-glikozilacija ima strukturnu ulogu te utječe na efektorske funkcije imunoglobulina G (IgG-a). Promjena glikozilacije povezuje se s kompleksnim bolestima za čiji se mehanizam nastanka kao modelni organizmi koriste miševi. Miševi s uklonjenim genima (eng. knockout) za receptore specifične za fragment koji kristalizira (FcγR) mogu dati uvid kako N-glikozilacija utječe na interakcije fragmenta koji kristalizira (Fc) i receptora Fcγ u reakcijama imunološkog sustava. Potrebno je razviti osjetljive visokoprotočne metode kojima se osim velikog broja uzoraka, može analizirati i N-glikozilacija manjih koncentracija IgG-a kao što je mišji IgG. Metodom LC-MS analizirana je N-glikozilacija IgG-a izoliranog iz seruma divljeg tipa i miševa s uklonjenim genima koji kodiraju FcγRI, FcγRIIB, FcγRIII, FcγRIV te γ teški lanac fragmenta Fc. Također, uspoređeni su glikanski profili IgG-a iz miševa divljeg tipa te miševa s uklonjenim genima za receptore Fcγ i γ lanac. Djelomično je optimizirana metoda CGE-LIF kojom je analizirana N-glikozilacija ljudskog IgG-a. N-glycosylation has structural roll and modulate immunoglobulin G (IgG) effector functions. Glycosylation changes are associated with complex diseases and mouse model organism is used for studies of disease development mechanism. Fragment crystallizable γ receptor (FcγR) knockout mouse can provide insight into how IgG N-glycosylation affects the fragment crystallizable (Fc) and FcγR interaction during immune reaction. It is necessary to bring into practice sensitive high-throughput methods not only for large number of samples, but also for N-glycosylation analysis in samples with low IgG concentrations as for example mouse IgG. N-glycosylation of FcγRI, FcγRIIB, FcγRIII, FcγRIV and γ-chain knockout mouse IgG is analysed by LC-MS method. Furthermore, glycoprofiles of IgG glycoforms from wild type mouse strains are compared with FcγR and γ chain knockouts. CGE-LIF method is partially optimised and human IgG N-glycosylation is analysed.