Desarrollo de un método NGS para la determinación de resistencias a antivirales en CMV ; Development of an NGS method for the determination of antiviral resistance in CMV

44 p. ; Este estudio se propuso desarrollar un método de secuenciación de nueva generación con pre-enriquecimiento mediante PCR dirigido a los genes UL27, UL51, UL54, UL56, UL89 y UL97, que se relacionan con la resistencia a antivirales en el citomegalovirus. Además, se buscó comparar la sensibilidad y especificidad de la secuenciación de Sanger y la NGS en este contexto. Para alcanzar estos objetivos, se obtuvo ADN de muestras clínicas del año 2023, procedentes de pacientes con infección por CMV de varias regiones del país, que presentaban sospecha de resistencia del CMV a los antivirales. Estas muestras fueron sometidas a amplificación mediante PCR y posteriormente secuenciadas utilizando Sanger y NGS. La metodología de NGS desarrollada demostró su capacidad para secuenciar y analizar regiones más extensas de los genes de interés. Las muestras que arrojaron resultados indeterminados mediante la secuenciación de Sanger fueron determinadas con éxito a través de la secuenciación de nueva generación. Mediante este último abordaje, se logró identificar la mutación L595S, asociada al gen UL97 y que confiere una alta resistencia a Ganciclovir. Este hallazgo reforzó la alta sensibilidad y eficacia de la secuenciación de próxima generación en comparación con la técnica de Sanger. ; This study set out to develop a next-generation sequencing approach with PCR pre-enrichment targeting the UL27, UL51, UL54, UL56, UL89 and UL97 genes, which are associated with antiviral resistance in cytomegalovirus. In addition, we sought to compare the sensitivity and specificity of Sanger sequencing and NGS in this context. To achieve these objectives, DNA was obtained from clinical samples from CMV infected patients submitted during 2023, collected in several regions of the country, which presented suspicion of CMV resistance to antivirals. These samples were subjected to PCR amplification and subsequently sequenced using both methods. The NGS methodology developed in this study demonstrated its ability to sequence and analyze larger ...